紫外追蹤-生物素-NHS酯（UV-Tracer Biotin NHS ester）是一種結(jié)合生物素、NHS酯活性基團(tuán)與紫外追蹤功能的生物分子標(biāo)記試劑。

一、化學(xué)特性

• 核心結(jié)構(gòu)：由三部分組成，包括生物素（Biotin）、NHS酯基團(tuán)和紫外追蹤基團(tuán)。

• 生物素（Biotin）：提供與鏈霉親和素（Streptavidin）或抗生物素蛋白（Avidin）的高親和力結(jié)合能力，用于后續(xù)的分離或檢測。

• NHS酯基團(tuán)：與生物分子（如蛋白質(zhì)、多肽）的伯胺基（-NH?）反應(yīng)，形成穩(wěn)定的酰胺鍵共價(jià)連接。

• 紫外追蹤基團(tuán)：嵌入二苯甲酮類熒光片段，在紫外光下發(fā)出藍(lán)色熒光，用于標(biāo)記效率的實(shí)時(shí)監(jiān)測。

• 物理性質(zhì)：通常為淡黃色或白色粉末，溶于水及部分有機(jī)溶劑（如二甲基亞砜DMSO、N,N-二甲基甲酰胺DMF）。

結(jié)構(gòu)式：

二、功能

• 共價(jià)結(jié)合：通過NHS酯基團(tuán)與目標(biāo)分子的伯胺基反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)生物素和熒光基團(tuán)的共價(jià)標(biāo)記。

• 熒光示蹤：在紫外光激發(fā)下發(fā)出熒光，可直接監(jiān)測標(biāo)記效率，無需額外熒光染料。

• 光交聯(lián)：光照后，熒光基團(tuán)產(chǎn)生活性中間體（如氮賓），與鄰近分子形成共價(jià)交聯(lián)，可“鎖定"瞬時(shí)相互作用。

三、應(yīng)用場景

• 蛋白質(zhì)標(biāo)記：標(biāo)記蛋白質(zhì)后，通過鏈霉親和素富集目標(biāo)蛋白復(fù)合物，用于免疫分析（如Western Blot、ELISA），提高檢測靈敏度。

• 核酸標(biāo)記：標(biāo)記寡核苷酸，用于熒光原位雜交（FISH）或測序分析。

• 活細(xì)胞成像：追蹤細(xì)胞表面蛋白分布、內(nèi)吞途徑或信號通路動(dòng)態(tài)。

• 蛋白質(zhì)相互作用研究：結(jié)合光交聯(lián)技術(shù)，捕獲瞬態(tài)相互作用，用于蛋白質(zhì)組學(xué)研究。

• 傳感器開發(fā)：構(gòu)建高靈敏度生物傳感器，用于檢測病原體或生物標(biāo)志物。

• 靶向遞送：修飾納米載體，實(shí)現(xiàn)藥物或基因的靶向輸送。

四、使用注意事項(xiàng)

• 溶解性：NHS酯基團(tuán)對水分敏感，易水解失效。溶解時(shí)應(yīng)優(yōu)先使用無水DMSO或DMF，再稀釋至緩沖液。從冰箱取出后，應(yīng)室溫回溫30-60分鐘再開蓋，防止水汽凝結(jié)。

• 反應(yīng)條件：反應(yīng)pH值應(yīng)調(diào)至7.0-8.5（中性/微堿性），避免使用含氨基的緩沖液（如Tris），可改用碳酸鹽緩沖液（pH 9.0）。若目標(biāo)分子缺乏伯氨基或氨基被屏蔽，應(yīng)改用針對其他基團(tuán)的生物素化試劑。

• 標(biāo)記效率驗(yàn)證：通過紫外吸收、熒光檢測或Western Blot等方法驗(yàn)證標(biāo)記效果。

• 儲(chǔ)存條件：應(yīng)保存在-20°C以下，避光、避濕。取用時(shí)需保持干燥，避免頻繁的溶解和凍干。

• 安全防護(hù)：操作時(shí)應(yīng)佩戴適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)裝備，如實(shí)驗(yàn)手套、護(hù)目鏡等，避免吸入、接觸皮膚和眼睛。

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